到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機制不僅與巨噬細胞有關(guān)，在研究抗補體機制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補體機制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細支氣管上皮上。在終端呼吸性細支氣管上皮細胞也表達α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細支氣管細胞上，部分肺泡壁細胞表達這種受體，這種細胞為肺泡Ⅱ型細胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細胞既表達α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標準的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1. 雪貂模型感染后臨床表現(xiàn)

雪貂感染致死劑量的甲型H1N1病毒后表現(xiàn)出顯著的臨床癥狀變化，第2天攝食量減少，第3天活動減少，精神萎靡，眼半閉，呼吸微弱，對外界刺激無反應(yīng)，呈瀕死狀態(tài)（圖1）。根據(jù)其表現(xiàn)設(shè)立了評分標準：NIH提供的雪貂感染實驗觀察指標分為鼻部癥狀和活動度兩個部分，具體指標見表1。雪貂感染甲型H1N1后的臨床癥狀評分如圖2所示。

圖1雪貂感染甲型H1N1病毒后的臨床表現(xiàn)

表1雪貂感染后臨床評分標準

圖2雪貂感染甲型H1N1病毒后的臨床癥狀評分

雪貂感染后第1天體溫顯著上升至40℃以上，隨后逐漸下降到正常水平（圖3）。感染后第4天開始體重顯著下降，最高降幅達23% （圖4）。

圖3雪貂感染甲型H1N1病毒后的體溫變化情況

圖4雪貂感染甲型H1N1病毒后的體重變化情況

2. 雪貂模型感染后病毒在組織中復(fù)制情況

攻毒后第7天安樂雪貂，取主要組織臟器進行病毒載量測定，結(jié)果顯示氣管、心、脾、腎及腦組織中均可檢測到高載量的病毒。

3. 雪貂模型感染后病毒在上呼吸道中動態(tài)復(fù)制情況

雪貂感染甲型H1N1病毒后，每天刮取其上呼吸道拭子，檢測病毒動態(tài)復(fù)制情況，結(jié)果顯示鼻拭子中甲型H1N1病毒的攜帶情況顯著高于咽拭子，咽拭子于感染后第4天達到峰值，鼻拭子在感染后2-5天均保持較恒定的高水平復(fù)制狀態(tài)（圖5）。

圖5雪貂感染甲型H1N1病毒后在上呼吸道中動態(tài)復(fù)制情況

4. 雪貂模型感染后肺組織病理檢測結(jié)果

病理結(jié)果顯示，雪貂感染甲型H1N1病毒后肺部可見點灶狀暗紅色區(qū)域或片狀病變，切面亦可見點灶狀暗紅色區(qū)域（圖6）。

圖6雪貂感染甲型H1N1病毒后肺組織病理檢測情況. A：正常肺組織對照（×40）；B：彌漫性間質(zhì)性肺炎（×40）；C：彌漫性間質(zhì)性肺炎（×100）；D：免疫組化顯示感染甲型H1N1病毒的上皮細胞呈陽性（×100）。

5. 雪貂模型感染后特異性抗血清產(chǎn)生及持續(xù)情況

血凝抑制實驗結(jié)果顯示，雪貂感染甲型H1N1病毒后，于感染后第9天達到峰值，HI效價可達1：1280，感染后第19天抗體效價降至1：640，并可持續(xù)至感染后第89天（圖7）。

圖7雪貂模型感染后特異性抗血清產(chǎn)生及持續(xù)情況

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動物模型。它對人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過程和機體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對人流感病毒高度易感外，對禽流感、豬流感病毒也十分敏感，且感染后出現(xiàn)典型癥狀。

分子生物學(xué)研究顯示，這是由于雪貂的呼吸道上皮細胞表面存在人流感病毒特異性受體α2,6糖鍵連接的唾液酸，而其肺泡上皮細胞表面也存在著禽流感病毒特異性受體α2,3糖鍵連接的唾液酸。

概括起來，相較于其他流感動物模型，雪貂的優(yōu)勢為 ：（1）雪貂感染流感病毒后的癥狀、發(fā)病機制和免疫反應(yīng)與人類極為相似。（2）人甲、乙型流感病毒均可自然感染雪貂，這為在完全控制的群體內(nèi)觀察流感的傳播規(guī)律和流感病毒抗原性的漂移和轉(zhuǎn)變提供了可能。（3）雪貂的氣管較長，這樣就使其上、下呼吸道區(qū)室化，有利于研究流感病毒對呼吸道不同區(qū)域的效應(yīng)差異。（4）雪貂作為動物模型比嚙齒類大，易于監(jiān)測其體溫、脈搏和呼吸頻率。（5）在小型動物中，雪貂是唯一感染甲型流感病毒后自然出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)的動物模型。基于此，目前雪貂作為理想的流感動物模型已被廣泛應(yīng)用于流感發(fā)病機理等各方面的研究，為人類流感研究做出了重要貢獻。

去勢雪貂（Mustela Pulourius Furo），4-10月齡，500-1000克。實驗前進行血清學(xué)檢查，HI方法檢測血清甲型H1N1抗體，抗體陰性為合格雪貂方可入組實驗。

雪貂經(jīng)過輕度麻醉后滴鼻感染甲型H1N1病毒。實驗的觀察期為10天。皮下植入體溫芯片用于監(jiān)測體溫、體重變化。每日觀察雪貂臨床癥變化，在感染后第5天處死動物，取組織樣本用于監(jiān)測病毒復(fù)制動力曲線和動物感染后組織炎癥反應(yīng)檢查。

流感是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，它通過飛沫傳播，能在短時間內(nèi)迅速蔓延。2009年起源于北美的甲型H1N1流感曾經(jīng)造成世界范圍內(nèi)的大流行，WHO曾將其警戒級別提升至最高級別6級，給人類社會和經(jīng)濟造成極大的負面影響。一項由WHO組織開展的研究顯示，在2009至2010年的流感季中，全世界共有20%至27%的人被甲型H1N1病毒感染。盡管2010年8月WHO宣布已進入“流感大流行后期”，意味著“正常監(jiān)測顯示大多數(shù)國家的流感活動水平已恢復(fù)到季節(jié)性流感水平”，但同時指出，“局部地區(qū)仍有暴發(fā)甲型H1N1流感疫情的可能。”

本次疫情患者感染的是一種H1N1亞型流感病毒新毒株，它包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、歐洲、亞洲三類H1N1流感病毒的基因片段。這種病毒已被證實經(jīng)由人際傳播，人感染后會出現(xiàn)高燒、精神不振、厭食、咳嗽等癥狀。科學(xué)家指出，打噴嚏、咳嗽和物理接觸都有可能導(dǎo)致甲型H1N1流感病毒在人群間傳播。這次甲型H1N1流感病毒呈現(xiàn)的另一大特點是對青壯年攻擊性強，目前確診甲型H1N1流感死者中大多數(shù)年齡都在25~ 45歲之間。

疾病臨床表現(xiàn)及致病機制

根據(jù)甲型H1N1流感病毒特性，該病的傳播途徑可能是通過近距離空氣飛沫傳播，以及接觸病豬、病人呼吸道分泌物和密切接觸造成傳播。傳播模式為：（1）主要是由于人吸入感染豬、人的分泌物或排泄物；（2）直接接觸病豬、人后，通過人的消化道，呼吸道，皮膚損傷和眼結(jié)膜等途徑傳播；（3）現(xiàn)有資料尚不支持垂直傳播的存在；4）而在豬、人中是多途徑傳播的。可通過空氣飛沫,水源,密切接觸,垂直傳播,人的機械傳播和蚊蟲叮咬傳播等。

大多數(shù)人感染甲型H1N1病毒后僅表現(xiàn)為輕癥，而少數(shù)患者感染后，會表現(xiàn)出迅速加重的下呼吸道感染，發(fā)生急性肺損傷（ALI）、急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），甚至呼吸衰竭、多器官功能障礙綜合癥（MODS）等，危及患者生命。