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條件性Pfkfb3過表達(dá)小鼠模型

健明迪檢測(cè)提供的條件性Pfkfb3過表達(dá)小鼠模型,討論與結(jié)論 該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型,待其到40周齡時(shí),檢測(cè)其dsDNA等,結(jié)合皮膚癥狀變化,來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立,具有CMA,CNAS認(rèn)證資質(zhì)。
條件性Pfkfb3過表達(dá)小鼠模型
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討論與結(jié)論

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型,待其到40周齡時(shí),檢測(cè)其dsDNA等,結(jié)合皮膚癥狀變化,來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型,為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

生物安全性

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK(鄂)2015-0027。

(1)建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間,小鼠飼養(yǎng)室3間,隔離觀察室1間,實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間,潔物存放室1間,清洗消毒室1間。此外,屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

(2)設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度:20~26°C;日溫差:≤4°C;相對(duì)濕度:40%~70%;換氣次數(shù):15~20次/h;氣流速度:≤0.2m/s;壓強(qiáng)梯度:20~50Pa;空氣潔凈度:7級(jí);菌落數(shù):≤3個(gè)/皿;氨濃度:≤14mg/m3;噪聲:≤60dB;Z低工作照度:≥200lx;動(dòng)物照度:15~20lx;晝夜明暗交替時(shí)間:12/12h。

(3)通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)??諝饨?jīng)過初、中、三級(jí)過濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

(4)照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開關(guān),根據(jù)實(shí)際需要,調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

(5)通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求,人員進(jìn)入后不能隨意出入,而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要,故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī),按照房間順序編排電話號(hào)碼,各室內(nèi)電話可相互連通,并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系,保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

(6)監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī),能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài);也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程,避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染;并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察,減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

(7)供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水,將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室,設(shè)置接水槽,為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道,清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

(8)供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電,如果出現(xiàn)故障,不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理,就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡,造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng),并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng),以便及時(shí)檢修和維護(hù),保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

(9)消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染,按照不同物品的特性,進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)S玫臋C(jī)動(dòng)門真空滅菌器消毒。

(10)動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具,具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm,適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,配有底盤和食槽,確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間,同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

(11)墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí),墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物,起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長發(fā)育和繁殖性能。目前,所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

(12)飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測(cè)一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營養(yǎng)成分指標(biāo),保證飼料的質(zhì)量。

評(píng)價(jià)驗(yàn)證

Pfkfb3基因編碼的蛋白具有6-磷酸果糖-2-激酶活性,催化合成果糖-2,6-二磷酸(F2,6BP),以及果糖-2,6-二磷酸酶活性,催化F2,6BP的降解。該蛋白是細(xì)胞周期進(jìn)程和防止細(xì)胞凋亡所必需的,也參與了自噬過程。PFKFB3的表達(dá)在許多人類癌癥中都發(fā)生了明顯上調(diào),在促進(jìn)休眠轉(zhuǎn)移細(xì)胞重新激活增殖程序和復(fù)發(fā)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

制備方法

F0代構(gòu)建:

研究背景

Pfkfb3基因編碼的蛋白屬于雙功能蛋白家族,是一種前糖酵解酶,參與果糖-2,6-二磷酸的合成和降解,果糖-2,6-二磷酸是一種控制真核生物糖酵解的調(diào)節(jié)分子。PFKFB3蛋白具有6-磷酸果糖-2-激酶活性,催化合成果糖-2,6-二磷酸(F2,6BP),以及果糖-2,6-二磷酸酶活性,催化F2,6BP的降解。該蛋白是細(xì)胞周期進(jìn)程和防止細(xì)胞凋亡所必需的,也參與了自噬過程。它作為周期蛋白依賴性激酶1的調(diào)節(jié)因子,將葡萄糖代謝與腫瘤細(xì)胞的增殖和生存聯(lián)系起來。PFKFB3的表達(dá)在許多人類癌癥中都發(fā)生了明顯上調(diào),在促進(jìn)休眠轉(zhuǎn)移細(xì)胞重新激活增殖程序和復(fù)發(fā)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

模型信息

中文名稱:條件性Pfkfb3過表達(dá)小鼠模型

英文名稱:Pfkfb3 conditional expressing mouse model

類型:代謝性疾病動(dòng)物模型

分級(jí):NA

用途:用于代謝相關(guān)疾病研究。

研制單位:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所

保存單位:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所

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